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液相色譜法與液相色譜儀

更新時(shí)間:2017-02-15      點(diǎn)擊次數(shù):2045
液相色譜法是20世紀(jì)60年代末在經(jīng)典液相色譜的基礎(chǔ)上發(fā)展起來的一種現(xiàn)代色譜分析方法,歷*曾出現(xiàn)過不同的叫法,如,高壓液相色譜(HPLC)、高速液相色譜(HSLC)和高分辨液相色譜(HRLC)。就分離原理而言,HPLC與經(jīng)典柱層析(色譜)沒有本質(zhì)的區(qū)別,但由于采用了高壓輸液泵、微粒固定相和高靈敏度檢測(cè)器,HPLC在分析速度、分離效率、檢測(cè)靈敏度和操作自動(dòng)化方面,都達(dá)到了可與GC相比的程度,并保持了樣品適用范圍廣、流動(dòng)相種類多和便于制備的柱層析優(yōu)點(diǎn),在生物工程、制藥工業(yè)、食品工業(yè)、環(huán)境監(jiān)測(cè)和石油化工等領(lǐng)域獲得了廣泛的應(yīng)用! HPLC的特點(diǎn):①樣品適用范圍廣;②分離效率高;③檢測(cè)靈敏度高;④分析速度快;⑤樣品回收方便; 液相色譜法的分類:HPLC的分類方法有多種,比較常見的有三種:(1)按照分離機(jī)理分類:①吸附色譜②分配色譜③離子交換色譜(IEC)④體積排阻色譜(SEC)⑤親和色譜(AC)(2)按照色譜柱洗脫動(dòng)力學(xué)分類:①洗脫法②前沿法③置換法(3) 按照分離目的分類:①分析液相色譜②制備液相色譜 HPLC分析常用的樣品處理技術(shù):粉碎、冷凍干燥、氣體萃?。斂辗治龊痛祾?捕集)、溶劑萃?。ɑ亓骰蛩魇陷腿?,加壓溶劑萃取)、固相萃取、固相微萃取、超臨界流體萃取、微波萃取、超聲波萃取、微透析、衍生化、膜分離、蒸餾、吸附、離心、過濾、濃縮和溶解等。 色譜定性分析方法標(biāo)準(zhǔn)物質(zhì)對(duì)照定性;利用文獻(xiàn)數(shù)據(jù)定性;利用選擇性檢測(cè)器定性;在線聯(lián)用儀器定性;其它定性方法; 液相色譜儀使用及維護(hù)方法液相色譜儀使用時(shí)要非常注意!使用卡套柱時(shí),兩端的卡套應(yīng)時(shí)刻連接在柱芯上。不管您是平衡色譜柱或是清洗,任何時(shí)候都不能將卡套取下來,否則會(huì)造成填料的流失。 液相色譜柱使用注意:卡套柱的安裝(加預(yù)柱):將卡套架套入柱芯將兩片夾套片嵌入柱芯的凹槽,使夾套高于柱芯將已套到柱芯上的卡套架向上推,直至高過夾套片將“子彈頭"預(yù)柱放入卡套片內(nèi)將卡套帽和卡套架旋在一起,然后用手?jǐn)Q緊然后依同樣的順序連接好柱子的另一端平衡色譜柱 反相色譜柱在經(jīng)過出廠測(cè)試后是保存在乙腈/水中的。請(qǐng)一定確保您所使用的流動(dòng)相和乙腈/水互溶。由于色譜柱在儲(chǔ)存或運(yùn)輸過程中可能會(huì)干掉,因此在用流動(dòng)相分析樣品之前,應(yīng)使用10~20倍柱體積的甲醇或乙腈平衡色譜柱;如果您所使用的流動(dòng)相中含有緩沖鹽,應(yīng)注意用純水“過渡"。硅膠柱或極性色譜柱在經(jīng)過出廠測(cè)試后是保存在正庚烷中的。如果該色譜柱需要使用含水的流動(dòng)相,請(qǐng)?jiān)谑褂昧鲃?dòng)相之前用乙醇或異丙醇平衡如何平衡色譜柱?平衡過程中,將流速緩慢地提高用流動(dòng)相平衡色譜柱直到獲得穩(wěn)定的基線(緩沖鹽或離子對(duì)試劑度如果較低,則需要較長(zhǎng)的時(shí)間來平衡)色譜柱的再生。。。進(jìn)行色譜柱再生時(shí),應(yīng)使用一個(gè)廉價(jià)的泵,我們建議不使用您的液相色譜儀上的泵。 注意:在對(duì)NH2改性的色譜柱進(jìn)行再生時(shí),由于NH2可能成銨根離子的形式存在,因此,應(yīng)該在水洗后用0.1M的氨水沖洗,然后再用水沖洗至堿溶液*流出。如果簡(jiǎn)單的有機(jī)溶劑/水的處理不能夠*洗去硅膠表面吸附的雜質(zhì),用0.05M稀硫酸沖洗非常有效。 液相色譜的常用術(shù)語1.色譜曲線(chromatogram):在色譜法中,當(dāng)樣品加入后,樣品中各組分隨著流動(dòng)相的不斷向前移動(dòng)而在兩相間反復(fù)進(jìn)行溶解、揮發(fā),或吸附、解吸的過程。如果各組分在固定相中的分配系數(shù)(表示溶解或吸附的能力)不同,就有可能達(dá)到分離。分配系數(shù)小的組分滯留在固定相中的時(shí)間短,在柱內(nèi)移動(dòng)的速度快,先流出柱子;分配系數(shù)大的組分滯留在固定相中的時(shí)間長(zhǎng),在柱內(nèi)移動(dòng)的速度慢,后流出柱子;分離后的各組分經(jīng)檢測(cè)器轉(zhuǎn)換成電信號(hào)而記錄下來,得到一條信號(hào)隨時(shí)間變化的曲線,稱為色譜流出曲線或 “色譜峰",理想的色譜流出曲線應(yīng)該是正態(tài)分布曲線。2.(色譜)峰(chromatographic peak):色譜柱流出組分通過檢測(cè)器系統(tǒng)時(shí)所產(chǎn)生的響應(yīng)信號(hào)的微分曲線。3.峰底(peak base):峰的起點(diǎn)與終點(diǎn)之間的連接的直線。4.峰高(h,peak height):色譜峰zui大值點(diǎn)到峰底的距離。5.峰寬(W ,peak width):在峰兩側(cè)拐點(diǎn)處所作切線與峰底相交兩點(diǎn)的距離。6.半高峰寬(Wh/2 ,peak with d at half height):通過峰高的中點(diǎn)作平行于峰底的直線,此直線與峰兩側(cè)相交兩點(diǎn)之間的距離(圖1 中的HJ)。7.峰面積(A ,peak area):峰與峰底之間的面積(圖1中的CHEJDC)。8.拖尾峰(tailing peak):后沿較前沿平緩的不對(duì)稱的峰。9.前伸峰(leading peak):前沿較后沿平緩的不對(duì)稱的峰。(又叫伸舌峰、前延峰)10.假峰(ghost peak):除組分正常產(chǎn)生的色譜峰外,由于儀器條件的變化等原因而在譜圖上出現(xiàn)的色譜峰,即并非由試樣所產(chǎn)生的峰。這種色譜峰并不代表具體某一組分,容易給定性、定量帶來誤差。(又叫鬼峰)11.畸峰(distrorted peak):形狀不對(duì)稱的色譜峰,前伸峰、拖尾峰都屬于這類。 12.反峰(negative peak):也稱倒峰、負(fù)峰,即出峰的方向與通常的方向相反的色譜峰。

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